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代謝表型試驗該如何操作?一起來看下

更新時間:2020-04-26      點擊次數(shù):1338
  參與藥物代謝的CYP450酶主要為CYP1、CYP2和CYP3三個家族,共有7種重要的亞型,分別為CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1和CYP3A4。如選用特異的選擇性抑制劑抑制不同亞型的酶的活性,便可研究藥物的酶代謝表型
  根據(jù)微粒體種屬的不同,可根據(jù)實際需求選擇人肝微粒體、恒河猴肝微粒體、比格犬肝微粒體、大鼠肝微粒體和小鼠肝微粒體中的一種。需于-70℃冰箱冷凍保存,切記避免反復(fù)凍融。代謝表型試驗具體操作如下:
 

代謝表型

  1、試驗組:
 ?。?)冰浴融化試劑盒各組分,置于冰上待用;
  (2)除微粒體外,將孵育體系其它各組分按照配比混合并吹吸混勻,于37℃預(yù)孵育5min;
 ?。?)將以上混合液195μL/管分裝至1.5mL離心管中,于37℃水浴中保溫,5μL/反應(yīng)加入肝微粒體,吹吸3次混勻于37℃水浴條件下啟動代謝反應(yīng),使用秒表計時;
  (4)于設(shè)定孵育時間點,向孵育體系中加入200μL預(yù)冷的乙腈終止反應(yīng)(預(yù)冷乙腈:孵育體系體積=1:1)。
  2、對照組:
 ?。?)加陽性底物組:反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑,并將受試物換為陽性底物,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補齊;
 ?。?)無抑制劑組:反應(yīng)體系中不加選擇性抑制劑,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補齊;
  (3)無A液、B液組:反應(yīng)體系中不加A液和B液,其它組分加入量不變,缺少體積用0.1MPBS緩沖液補齊。
  代謝表型試驗注意事項:
  1、試驗開始前,請自行準(zhǔn)備1.5mL離心管、不同規(guī)格槍頭、乙腈、37℃水浴鍋等。
  2、僅供科研使用,不能用于人體及動物的治療或臨床診斷。
  3、使用前,需于冰浴條件下解凍并混合均勻。
  4、于-70℃冰箱冷凍保存,切勿反復(fù)凍融。
  5、在使用過程中,也可根據(jù)實際實驗需求調(diào)整各組分的加入量。
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